植物細胞壁中存在大量不能被豬消化的多聚糖類物質，如半纖維素多聚糖、果膠質（富含有半乳糖醛*的多聚糖）等。研究人...

問題詳情：

植物細胞壁中存在大量不能被豬消化的多聚糖類物質，如半纖維素多聚糖、果膠質（富含有半乳 糖醛*的多聚糖）等。研究人員通過基因工程、胚胎工程等技術培育出轉多聚糖酶基因（manA）豬，主要流程如下 圖（neo 為新黴素抗*基因）。

（1）將該重組質粒成功匯入受體細胞後，經培養，發現約有 50%的細胞能正常表達目的基因產物，原因是____________________________________________。通過①過程獲得的重組質粒含有 4.9 kb 個鹼基對，其中 manA 基因含有 1.8 kb 個鹼基對。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ聯合酶切割其中一種重組質粒，只能獲得 1.7 kb 和 3.2 kb 兩種 DNA 片段，若用上述聯合酶切割同等長度的另一種重組質粒，則可獲得__________kb 長度兩種的 DNA 片段。

（2）圖 2 中，豬胎兒成纖維細胞一般選擇傳代培養 10 代以內的細胞，原因是_____________________，豬的卵母細胞一般要培養到__________期。

（3）在④過程的早期胚胎培養時，通常需要定期更換培養液，目的是______________________________________________，一般培養到__________階段，可向受體移植。

（4）⑤過程前，通常需對受體母豬注*孕激素，對其進行__________處理。

【回答】

目的基因與質粒連線時，存在正向連線和反向連線兩種重組質粒    3.5和1.4    保持正常的二倍體核型，遺傳物質不變    MⅡ中（或“減數第二次*中”）    清除代謝廢物（減少代謝廢物對細胞的毒害，補充營養）    桑椹胚或囊胚    同期發情   

【分析】

分析題圖：①為基因表達載體的構建、②為將目的基因匯入受體細胞、③為體細胞核移植、④為早期胚胎培養、⑤為胚胎移植。

【詳解】

（1）由圖1可知，BamH I和Bgl Ⅱ切割產生的粘*末端相同，用這兩種限制酶切割目的基因和質粒後，構建基因表達載體時會出現正向連線和反向連線兩種重組質粒，故有50%的細胞能正常表達目的基因產物，剩下部分不能正常表達目的基因產物。由於BamH I和Bgl Ⅱ切割產生的粘*末端連線後，不能被BamH I或Bgl Ⅱ識別切割，只有BamH I切割的粘*末端經過連線後可以被BamH I識別切割，故重組質粒只有1個BamH I識別位點和1個EcoR I識別位點。重組質粒存在正向連線和反向連線兩種型別，若用BamH I和EcoR I聯合酶切其中一種重組質粒，只能獲得1.7kb和3.2kb兩種DNA片段，說明右側BamH I和EcoR I之間的長度為1.7；用聯合酶切同等長度的另一種重組質粒，則切割的是BamH I左側的位點，又因為manA基因含有1.8kb個鹼基對，可獲得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb兩種DNA片段。

（2）豬胎兒成纖維細胞一般選擇傳代培養10代以內的細胞，原因是保持了正常二倍體核型，遺傳物質不變。細胞在傳至10～50代時，增殖會逐漸緩慢，以至於完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發生變化。在核移植時採集的卵母細胞，在體外培養到MⅡ中期（或“減數第二次*中期”）才進行去核*作，因為減數第二次*中期的卵母細胞體積大、易*作，營養物質豐富，細胞質中含有促進細胞核全能*表達的物質。

（3）在早期胚胎培養過程中，應定期更換培養液，清除代謝廢物，補充營養物質。胚胎一般培養到桑椹胚或囊胚階段，可向受體移植。

（4）過程⑤為胚胎移植，胚胎移植前，通常需對受體母豬注*孕激素，使其能同期發情，目的是使供體和受體生殖器官的生理狀態相同，為供體的胚胎移入受體提供相同的生理環境。

【點睛】

解答本題的關鍵是掌握基因工程的相關知識、核移植技術和胚胎移植技術，並能夠分析和判斷圖中各個字母代表的過程的名稱，結合題目的提示分析答題。

知識點：基因工程

題型：綜合題