回答下列（一）、（二）小題：（一）回答與柑橘加工與再利用有關的問題：（1）柑橘果實經擠壓獲得果汁後，需用果膠酶...

問題詳情：

回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與柑橘加工與再利用有關的問題：

（1）柑橘果實經擠壓獲得果汁後，需用果膠酶處理，主要目的是提高果汁的__________。為確定果膠酶的處理效果，對分別加入不同濃度果膠酶的果汁樣品，可採用3種方法進行實驗：①取各處理樣品，新增相同體積的__________，沉澱生成量較少的處理效果好。②對不同處理進行離心，用比*計對上清液進行測定，OD值__________的處理效果好。③對不同處理進行__________，記錄相同體積果汁通過的時間，時間較短的處理效果好。

（2）加工後的柑橘殘渣含有抑菌作用的香精油及較多的果膠等。為篩選生長不被香精油抑制且能高效利用果膠的細菌，從腐爛殘渣中分離得到若干菌株，分別用無菌水配製成__________，再均勻塗布在LB固體培養基上。配製適宜濃度的香精油，浸潤大小適宜並已__________的圓形濾紙片若干，再貼在上述培養基上。培養一段時間後，測量濾紙片周圍抑制菌體生長形成的透明圈的直徑大小。從直徑__________的菌株中取菌接種到含有適量果膠的液體培養基試管中培養，若有果膠酶產生，搖晃試管並觀察，與接種前相比，液體培養基的__________下降。

（二）回答與基因工程和植物克隆有關的問題：

（1）天然農桿菌的Ti質粒上存在著一段DNA片段（T-DNA），該片段可轉移並整合到植物細胞染*體上。為便於轉基因植物在組織培養階段的篩選，設計重組Ti質粒時，應考慮T-DNA中要有可表達的目的基因，還需要有可表達的__________。

（2）結合植物克隆技術進行轉基因實驗，為獲得轉基因植株，農桿菌侵染的宿主一般要選用具有優良*狀、較高的遺傳穩定*、__________及易被農桿菌侵染等特點的植物材料。若植物材料對農桿菌不敏感，則可用__________的轉基因方法。

（3）利用帶側芽的莖段獲得叢狀苗的過程與利用莖段誘導產生愈傷組織再獲得叢狀苗的過程相比，前者總培養時間__________，且不經歷__________過程，因而其遺傳*狀穩定，是大多數植物快速繁殖的常用方法。

（4）與發芽培養基相比，配製轉基因叢狀苗生根培養基時，可根據實際情況適當新增__________，促進叢狀苗基部細胞*形成愈傷組織並進一步分化形成__________，最終形成根。還可通過改變MS培養基促進生根，如_____（A．提高蔗糖濃度B．降低培養基濃度C．提高大量元素濃度D．不新增瓊脂）。

【回答】

    (1). 澄清度    (2). 95%乙醇    (3). 較小    (4). 抽濾    (5). 細菌懸液    (6). 滅菌    (7). 較小    (8). 粘*    (9). 抗*基因    (10). 全能*表達充分    (11). 顯微注*    (12). 短    (13). 脫分化    (14). 生長素    (15). 根的分生組織    (16). B

【解析】

【分析】

發芽培養基：3000mLMS培養基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g瓊脂，再加蒸餾水至4000mL，混合均勻加熱至瓊脂融化後，通過三角漏斗分裝至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共100瓶三角瓶，加上封口膜後1kg壓力下在滅菌鍋內滅菌20分鐘。

生根培養基：1000mLMS培養基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g瓊脂，再加蒸餾水至2000mL，混合均勻加熱至瓊脂融化後，通過三角漏斗分裝至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共50瓶三角瓶，加上封口膜後1kg壓力下在滅菌鍋內滅菌20分鐘。

【詳解】（一）（1）由於植物細胞壁和植物細胞間果膠的存在時，果汁的澄清度受到一定的影響，因此可以加入果膠酶使果膠降解為可溶*的半乳糖醛*，提高果汁的澄清度。判斷果膠酶的處理效果，可採用三種方法，①看果膠的剩餘量，果膠不溶於乙醇，加入95%的乙醇，沉澱量少的即果膠的剩餘量少，處理效果好，②進行離心處理，取上清液測OD值，OD值越小，說明降解越充分，果膠酶的處理效果越好，③對不同處理進行抽濾，記錄相同體積果汁的通過時間，固形物含量越少，時間越短，處理效果越好。

（2）為篩選不被香精油抑制且能高效利用果膠的細菌，需從腐爛殘渣中分離菌株，用無菌水配製成細菌懸液，再塗布在LB固體培養基上待篩選。由於目標是篩選不被香精油抑制的細菌，因此還需準備香精油，並將其製作成濾紙片貼在培養基上，香精油需滅菌處理。觀察濾紙片周圍的抑菌圈，直徑越小說明該菌株越不易被香精油抑制，因而成為初步待選的菌株。再進一步接種到含果膠的液體培養基中培養，果膠使植物細胞粘連，若果膠被降解，則液體培養基的粘*下降。

（二）（1）設計重組質粒時，除了要含有可表達的目的基因，還需要有可表達的抗*基因（如抗生素抗*基因），在新增抗生素的培養基上，含重組質粒的宿主細胞能夠生長，因而被篩選出來。

（2）轉基因實驗要求宿主細胞*狀優良、遺傳穩定*較高、全能*（細胞發育成個體的潛能）較高及易被農桿菌侵染等特點。若植物材料對農桿菌不敏感，可採用顯微注*的方法。

（3）利用帶側芽的莖段獲得叢狀苗的過程，比利用莖段誘導產生愈傷組織獲得叢狀苗的過程時間更短，因為不需要經歷脫分化的過程，而且遺傳*狀穩定。植物器官的分化需要一定的營養物質及適宜的激素配比，配製叢狀苗生根培養基需根據實際情況新增生長素，促進基部細胞形成愈傷組織，並進一步分化形成根的分生組織，最終形成根。比較發芽培養基和生根培養基可知MS培養基的濃度下降，因此可降低培養基的濃度促進生根。故選B。

【點睛】本題主要考查果膠的降解、基因工程及植物克隆知識，要求學生熟悉教材，並能將理論知識與實際應用相結合。

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：綜合題