下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg匯入巴斯德畢赤酵母菌生產乙肝疫苗的過程及有關資料,請分析...
問題詳情:
下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg匯入巴斯德畢赤酵母菌生產乙肝疫苗的過程及有關資料,請分析回答下列問題.
資料1:巴斯德畢赤酵母菌是一種*基營養型酵母菌,能將*醇作為其唯一碳源,此時AOX1基因受到誘導而表達.
資料2:巴斯德畢赤酵母菌體內無天然質粒,所以科學家改造出了圖1所示的pPIC9K質粒用作載體,其與目的基因形成的重組質粒經酶切後可以與酵母菌染*體發生同源重組,將目的基因整合於染*體中以實現表達.
(1)如果要將HBsAg基因和pPIC9K質粒重組,應該在HBsAg基因兩側的A和B位置接上 、 限制酶識別序列,這樣設計的優點是避免質粒和目的基因自身環化.
(2)酶切獲取HBsAg基因後,需用 將其連線到pPIC9K質粒上,形成重組質粒,並將其匯入大腸桿菌以獲取 .
(3)步驟3中應選用限制酶 來切割重組質粒獲得重組DNA,然後將其匯入巴斯德畢赤酵母菌細胞.
(4)為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉化是否成功,在培養基中應該加入卡拉黴素以便篩選,轉化後的細胞中是否含有HBsAg基因,可以用 方法進行檢測.
(5)轉化的酵母菌在培養基上培養一段時間後,需要向其中加入 以維持其生活,同時誘導HBsAg基因表達.
(6)與大腸桿菌等細菌相比,用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞,其優點是在蛋白質合成後,細胞可以對其進行 並分泌到細胞外,便於提取.
【回答】
(1)SnaBⅠAvrⅡ
(2)DNA連線酶 大量重組質粒
(3)BglⅡ
(4)DNA分子雜交
(5)*醇
(6)加工(修飾)
知識點:生物技術的安全*和倫理問題
題型:填空題
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