［生物-現代生物科技專題］必答題（10分）Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎幹細胞（...

問題詳情：

［生物-現代生物科技專題］必答題（10分）

Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎幹細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在覈移植前應去除卵母細胞的_______________________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到_______________________期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③中，需要構建含有基因Rag2的表達載體。可以根據Rag2基因的_______________________設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PsⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。爲將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有_______________________酶的酶切位點。

（4）爲檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療後小鼠骨髓細胞的_______________________，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。

【回答】

【*】（10分）

（1）細胞核

（2）囊胚

（3）核苷*序列    HindⅢ和PstⅠ

（4）蛋白質

【解析】（1）步驟①是核移植過程。體細胞核移植前要除去受體卵母細胞的細胞核，原因是若不去掉卵母細胞的細胞核，就會造成細胞裏面就有兩個細胞核，使得遺傳物質是不穩定的。

（2）ES細胞是由早期胚胎（囊胚）的內細胞團分離出來的一類細胞。

（3）步驟③過程是匯入目的基因——Rag2基因於ES細胞中的基因表達載體的構建過程。在生物體外可透過PCR技術擴增目的基因，其條件是模板DNA、Rag2基因的核苷*序列設計引物、四種脫氧核苷*、熱穩定DNA聚合酶等，另外根據題幹可知，獲得Rag2目的基因需要用 HindⅢ和PstⅠ兩種限制酶，所以在構建表達載體時，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。

（4）檢測目的基因是否翻譯相應蛋白質時，應採用抗原—抗體雜交（免疫）法，即提取蛋白質，用相應的抗體進行抗體—抗原雜交，看是否有雜交帶。

知識點：胚胎工程

題型：填空題