7.(14分)人外周血單核細胞能合成白血球介素2(IL-2)。該蛋白為淋巴因子,可增強機體免疫功能,但在體內易...
問題詳情:
7.(14分)人外周血單核細胞能合成白血球介素2(IL-2)。該蛋白為淋巴因子,可增強機體免疫功能,但在體內易被降解。研究人員將IL-2基因與人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一個融合基因,在酵母菌中表達出具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2- HSA融合蛋白。技術流程如右圖。請回答:
(1)從健康人外周血分離得到的單核細胞,應置於 氣體環境中,並在適宜溫度和pH條件下培養48h。提取細胞總RNA,生成cDNA。圖中PCR過程的模板是 。
(2)表達載體1中的位點a應含有圖中 酶的識別序列,才能成功構建表達載體2。
(3)表達載體2匯入酵母菌後,融合基因轉錄出的mRNA中,與IL-2蛋白對應的鹼基序列中不能含有 密碼,才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白。
(4)白血球介素在單核細胞內合成的直接模板是 ,在體液免疫過程中,白血球介素可作用於受抗原刺激的B細胞,使B細胞增殖、分化,形成 細胞。
(5)將表達載體2匯入酵母細胞,在培養液中培養一段時間後離心,取
(上清液/菌體)進行產物鑑定。
【回答】
【*】
7.(14分)
(1)95%空氣和5%CO2 含有目的基因(IL-2基因)的cDNA
(2)限制酶BglⅡ
(3)終止
(4)mRNA 漿細胞和記憶細胞
(5)上清液
【解析】(1) 從健康人外周血分離得到的單核細胞,應置於95%空氣和5%CO2氣體環境中,並在適宜溫度和pH條件下培養48h。圖中PCR過程的模板是含有目的基因(IL-2基因)的cDNA。由mRNA到cDNA的過程是反轉錄過程。
(2)根據圖解可知目的基因的兩端分別是由限制酶EcoRⅠ、BglⅡ切割的,同一限制酶切割才能形成相同的黏*末端,表達載體1中具有EcoRⅠ的識別位點,因此位點a應與限制酶BglⅡ的識別位點相同,才能成功構建表達載體2。
(3)mRNA中如果含有終止密碼子,則會導致翻譯終止,不能合成目的蛋白。
(4) 白血球介素在單核細胞內合成的直接模板是mRNA ,在體液免疫過程中,白血球介素可作用於受抗原刺激的B細胞,使B細胞增殖、分化,形成漿細胞和記憶細胞。
(5)檢測蛋白質,可以利用蛋白質作為抗原,導致機體產生抗體進行檢測,由於抗體具有專一*,因此抗原—抗體雜交技術可以迅速檢測出酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白,在培養液中培養一段時間後離心,取上清液進行產物鑑定。
知識點:生物技術的安全*和倫理問題
題型:綜合題
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