SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的N蛋白是一種重要的結構蛋白,位於病毒顆粒的核心部分,並與病毒RNA結合。...
問題詳情:
SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的N蛋白是一種重要的結構蛋白,位於病毒顆粒的核心部分,並與病毒RNA結合。在病毒的包裝等過程中起重要作用。因此製備抗SARS-CoVN蛋白的單株抗體(mAb),對於診斷和治療疾病具有重要意義。用SARS-CoV製備單株抗體的流程如下圖:
(1)為了獲得大量的SARS冠狀病毒N蛋白目的基因,可以採用PCR技術在體外擴增,該技術還需要dNTP、_______酶以及引物等,擴增三輪需要的引物數量為___________個。
(2)若雙鏈DNA幾乎具有等量的淨電荷,且在高於等電點的pH溶液中帶負電荷。利用瓊脂糖凝膠電泳進行分離和純化DNA分子主要依據_______不同,採用外加電場使其分開。在電泳槽中還需要加入______作為參照物進行鑑定。
(3)小鼠被抗原蛋白免疫後,可以從___________中獲取細胞Ⅰ。細胞Ⅰ中可能包含多種能產生抗體的細胞,原因是______________________。
(4)為了分離出只能產生mAb的細胞Ⅱ,需要用___________技術對雜交瘤細胞進行篩選。目前可將圖中的___________作為疫苗,預防SARS冠狀病毒引發的疾病。
【回答】
Taq(耐高溫DNA聚合) 14 分子量(大小) 標準DNA 脾臟 小鼠曾經接觸過其他抗原 抗體檢測(抗原—抗體雜交) SARS冠狀病毒的N蛋白
【解析】由圖可知,提取相關mRNA,通過逆轉錄過程可形成SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的N蛋白的目的基因,將該目的基因構建基因表達載體後匯入人胚肺成纖維細胞,在該細胞中生產SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的N蛋白。將此蛋白注*到小鼠體內,可引起小鼠發生特異*免疫,產生能夠分泌與SARS冠狀病毒(SARS-CoV)的N蛋白結合的抗體的漿細胞,將此漿細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,經過培養和篩選可獲得能產生單一抗體的雜交瘤細胞,在體外培養該細胞,即可得到單株抗體(mAb)。
【詳解】(1)PCR過程需要耐高溫的DNA聚合酶,即Taq酶,第一次迴圈要1對引物,第二次要2對,第三次需要4對,擴增三輪總共需要7對也就是14個引物。
(2)由於雙鏈DNA幾乎具有等量的淨電荷,且在高於等電點的pH溶液中帶負電荷。所以利用瓊脂糖凝膠電泳分離純化DNA主要是依據不同DNA的分子量不同,在電泳槽中還需要加入標準DNA作為參照物。
(3)小鼠被抗原蛋白免疫後,從產生免疫反應的小鼠的脾臟中獲取B淋巴細胞也就是細胞I。因為小鼠曾經接觸過其他抗原,所以細胞I可能包含多種能產生抗體的細胞。
(4)為了分離出只能產生mAb的細胞II,可用抗原抗體雜交技術對雜交瘤細胞進行篩選,目前可以將圖中的SARS冠狀病毒的N蛋白作為疫苗,預防SARS冠狀病毒引發的疾病。
【點睛】
本題是利用基因工程和細胞工程生產單株抗體的過程,意在考查考生對所學知識的理解和應用能力。
知識點:DNA和蛋白質技術
題型:綜合題
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