如果已知一小段DNA的序列，可採用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側的序列，具體流程如下圖（以EcoRI酶...

問題詳情：

如果已知一小段DNA的序列，可採用PCR的方法，簡捷地分析出已知序列兩側的序列，具體流程如下圖（以EcoR I酶切為例）：

請據圖回答問題：

（1）步驟I用的EcoR I是一種__________酶，它通過識別特定的__________切割特定位點。

（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷*之間的3′-羥基與5′-**間形成__________；PCR循環中，升温到95℃是為了獲得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。

（3）若下表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是__________（從引物①②③④中選擇，填編號）。

（4）對PCR產物測序，經分析得到了片段F的完整序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷*序列），結果正確的是_________________。

A． 5′- AACTATGCG-----------AGCCCTT-3′

B． 5′- AATTCCATG-----------CTGAATT-3′

C． 5′- GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′

D． 5′- TTGATACGO----------CGAGTAC-3′

【回答】

    (1). 限制*核*內切（或限制）    (2). 核苷*序列    (3). **二酯鍵    (4). DNA單鏈    (5). 以DNA為模板的DNA鏈的延伸    (6). ②④    (7). B

【解析】

【分析】

採用PCR技術擴增DNA的過程為：變*、退火、延伸、終止，PCR技術擴增目的基因的原理：DNA雙鏈複製，引物是一小段單鏈DNA，引物5′端的鹼基可以與DNA兩條鏈的3′端的鹼基進行鹼基互補配對，可作為DNA複製的起始點，子鏈的延伸方向從5′→3′。

【詳解】（1）EcoR I是一種限制*核*內切酶，它通過識別特定的核苷*序列切割特定的位點。

（2）DNA連接酶可催化相鄰核苷*之間的3'-羥基和5'-**之間形成**二酯鍵；PCR循環中，升温到95℃時，DNA受熱變*後解旋為單鏈；Taq DNA聚合酶是一種耐高温的依賴於DNA模板的DNA聚合酶，能催化以DNA鏈為模板的DNA鏈的延伸。

（3）引物是一小段單鏈DNA，引物5'端的鹼基可以與DNA兩條鏈的3'端的鹼基進行鹼基互補配對，可作為DNA複製的起始點，子鏈的延伸方向從5'→3'，據題圖分析，結合已知序列可知，能與片段F左邊配對的引物為④，與右邊配對的引物為②，故步驟Ⅲ選用的PCR引物應當為②④。

（4）對PCR產物測序，得到片段F的完整序列，因為片段F是被限制酶EcoR I剪切的兩端，它識別的序列是GAATTC，且在G與A之間切割，所以5'端應該是AATTC，3'端是GAATT，故選B。

【點睛】本題主要考查PCR的過程和應用，意在強化考生對PCR技術的理解，要求考生能分析題圖提取有效信息，從引物鹼基序列、延伸方向等方面進行分析和解答，對考生的理解和分析能力提出了較高要求。

知識點：生物技術的安全*和倫理問題

題型：綜合題